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慢病毒细胞毒性的原因有哪些?使用什么方法提高感染效率呢?

时间:2019/11/15 15:36:12 | 浏览次数:

 

       我相信很多同学在进行病毒感染的操作时,为了提高感染效率,通常都会选择加入病毒。虽然病毒往往增加,但是细胞的状态变差了。这是什么原因?更多的时候,病毒增加了很多但仍然没有达到预期的效果,是否有更好的方法提高感染效率?
今天来给大家来做一次小科普。
首先,让我们看看慢病毒细胞毒性的原因。知道原因,我们就能找到对策。
1. 杂质
病毒溶液中含有的杂质蛋白、内毒素等对细胞产生的毒性(想知道的是前期:加入病毒后,看细胞是否半死不活)。可能是你的病毒不够“纯”)。特别是对于一些对外源刺激敏感的细胞,在严重的情况下会发生细胞死亡。这是病毒感染细胞以后,状态不同的主要原因。
2. 过度感染
外源基因的过度表达可导致靶细胞本身的正常代谢失衡。这是一些细胞过度敏感会死亡的主要原因。
因此,为了提高感染效率,可以适当增加感染因子,但病毒添加越多越好。对于敏感细胞,杂质对病毒细胞状态的影响可以通过高滴度和高纯度的慢性病毒降低。同时,不建议追求过高的感染效率,约80%的感染效率可以满足大多数实验的需要。
让我们来看看第二种情况:病毒已经被添加了很多,但是它仍然不能达到预期的效果。可以使用什么方法来提高感染效率?
那就得从影响慢病毒感染效率的因素说起了:
1.细胞膜流动性
2、细胞膜表面受体表现丰富
3 .病毒感染与体细胞的接触总面积和接触几率
4.细胞膜和病毒外壳蛋白之间的电荷是多少
专业的事情就交给吉凯基因,我们总结了大量的文献和实际操作提高感染效率的方法,大家可以根据自己的实验条件,有选择地使用
1 .调节细胞状态,感染时使用对数期细胞:增加细胞膜的流动性
2.降低感染时的血清浓度,使用无血清/低血清培养基:减少血清蛋白对病毒外壳蛋白的阻断
3、离心法、感染时密封细胞培养板,平转子离心机1000g离心1h,返回培养罐正常培养:增加慢病毒与细胞接触的概率,但对细胞有一定的机械损伤,机器要求高
4 .感染时加入Rentronectin等纤维蛋白:增加慢病毒与细胞接触的概率,但影响细胞壁状态
5.使用传统的感染试剂,如聚丙稀:中和细胞膜和病毒颗粒之间的电荷排斥,但聚丙稀本身具有细胞毒性,有些细胞对聚丙稀敏感,容易导致细胞状态恶化、形态改变甚至死亡。
6.使用新一代感染试剂Hitrans G:与凝聚胺(Polybrene)相比,可显著提高细胞感染效率,细胞毒性极低,更适合敏感细胞。
小结:
1.使用高滴速、高纯度的慢病毒可以降低病毒中杂质对细胞状态的影响。
2.使用低细胞毒性的感染剂,如Hitrans G,可在确保细胞状态的同时显著提高感染效率。
3.避免过度感染。一般来说,80%的感染效率可以满足实验的需要。


 

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