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血清沉淀不要怕?

时间:2019/10/28 10:17:36 | 浏览次数:

 

什么是血清沉淀?
血清中有多种类型的可见沉淀,原因很多,主要是纤维蛋白、磷酸钙和其他一些成分。
1. 纤维蛋白(Fibrin)
血清中大多数可见的沉积物属于这种类型。在生产过程中,血清收集、过滤(0.1μ m过滤的3倍)和灌装处理均在低温下快速完成,此时血清中的纤维蛋白原处于溶解状态。然而,血清中的纤维蛋白原在解冻后倾向于凝集,形成可见的沉淀。
2. 磷酸钙(Calcium Phosphate)
这是常见的沉淀成分,通常在血清中产生云雾状混浊。当产品储存在37℃时,这种现象尤其明显,在倒置显微镜下可以观察到小黑点的存在。这些小黑点在布朗运动的作用下四处游动,经常被误认为是微生物污染。
3. 其他成分(Other) 
血清中其他成分也沉淀,例如由胆固醇形成油脂滴或其他蛋白沉淀等
血清沉淀会影响细胞培养吗?
1. 细胞生长
出厂前,我们将对血清进行一系列质量检测,以确保血清质量符合严格标准。血清试验和细胞培养经验也表明,其沉淀成分不会影响血清作为细胞培养添加剂的性能。许多客户和其他血清供应商都证实了这一点。解冻后,血清中的纤维蛋白原倾向于凝集并形成可见的沉淀。
2. 怀疑污染
磷酸钙颗粒通常被认为是微生物污染,会引起不必要的担忧。正常情况下,当操作人员在融化血清后注意到雾状混浊时,他们通常将其储存在4℃的冰箱中观察,并考虑下一步是否继续使用。但是,如果沉淀更多的话,血清反而会变得浑浊,误以为是有血清污染。另外,倒置显微镜可以观察到血清中游动的黑点(磷酸钙粒子的布朗运动),容易误认为有微生物污染。
为了防止这种误解的发生,我们不建议客户培养血清来验证是否有污染,而是直接将血清接种在细菌培养基上进行培养,观察是否有细菌增殖。进一步进行革兰氏染色,用油镜( 100x10倍)观察,可以直接确认有无微生物污染。
怎样操作可以尽量避免沉淀出现?
1. 正确解冻
首先,必须正确解冻血清,使血清慢慢解冻。 从-20℃取出后,放入4℃冰箱慢慢解冻,最后在室温下解冻。如果直接从-20℃到室温或在37℃水浴中解冻,容易发生沉淀。在解冻过程中,请注意时不时缓慢摇晃瓶子,减少沉淀的产生。为了避免反复冻融,建议您单独使用血清。
2. 使用和保存注意事项
血清沉淀难以预测和避免,沉淀后无需担心,不会影响血清质量。众所周知,在以下情况下血清沉淀可能会增加:
1) 热灭活;
2) 37℃培养;
3) 反复冻融;
4) 伽马射线照射; 
5)在2-8℃下长期保存;
6) 长期保存于可自动化霜的冰箱中(温度不稳定)。
血清沉淀的形成机制多种多样,具体机制尚不十分清楚。我们仍然不能准确预测和控制血清沉淀的产生。目前市场上所有品牌的血清产品都有沉淀现象,这可以从各品牌官方网站上关于沉淀问题的陈述中得到证实。
出现血清沉淀该如何处理?
建议以2000 rpm 离心5分钟。 如果去掉上清液使用的话,比过滤更方便,不需要另外准备过滤心和针筒,不易污染。
总 结:
血清产品中沉淀是一种常见现象,但它不会影响血清质量,而且细胞培养也没有问题,所以您可以放心使用!


 

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